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ddH2和生理盐水
链霉亲和素能在高温、极端pH和存在变性剂的条件下保持生物活性,是自然界中最稳定的蛋白质之一。
是的,重组链霉亲和素在大肠杆菌中表达,经过严格的纯化和质控过程,确保产品的安全性和高效性。
蛋白A的优势在于其高流速和强结合能力,适合大规模抗体纯化。局限性包括非特异性结合和在特定条件下的稳定性问题。
通过重组表达去除N端白蛋白结合结构域后,蛋白G的血清蛋白结合水平降低,从而减少了非特异性结合,提高了纯化效率。
蛋白L适用于抗体片段的纯化以及那些不能被蛋白A和G有效结合的抗体亚型,如一些人源kappa轻链抗体。
主要区别在于PAM识别和切割末端。As Cas12a识别5'-TTTV PAM序列并产生交错末端,而Cas9识别5'-NGG PAM序列并产生平末端。交错末端在某些应用中更有利于DNA序列的精确方向整合。
As Cas12a(Cpf1)与crRNA形成的核糖核蛋白(RNP)转移到细胞中,更安全、快速,脱靶效应低,编辑效率高,逐渐成为CRISPR基因编辑的有效方式。
推荐将As Cas12a(Cpf1)核酸酶与Cas12a crRNA以等摩尔量结合。C末端带有SV40 NLS和nucleoplasmin NLS两个核定位信号,以及TEV蛋白酶切位点和6xHis标签,以确保最佳编辑效果。
人源基因敲除质粒是一种用于基因编辑技术的载体,通过构建并转染细胞,可以模拟特定基因的缺失或突变,从而研究该基因在疾病发生中的作用。
所有sgRNA文库细胞pool构建完成后都会通过NGS检测覆盖度,保证产品质量。