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CRISPR基因编辑筛选一站式服务
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CRISPR基因编辑筛选一站式服务

泓迅生物提供CRISPR一站式基因编辑服务，包括sgRNA序列设计、芯片合成、文库构建、NGS验证、病毒包装、文库细胞pool构建、高通量筛选和生信分析等。我们成功交付动植物和微生物等30+物种类型，数百个高质量CRISPR sgRNA文库，满足不同客户对文库的定制化需求，提供基因功能筛选全套解决方案。

服务优势
  • 数十种模式物种，定制化sgRNA设计
    数十种模式物种，定制化sgRNA设计
  • 丰富的sgRNA表达载体，提供转染级质粒
    丰富的sgRNA表达载体，提供转染级质粒
  • 正确率> 80%-99% <br>覆盖度>99% <br>均一性< 1.6-10
    正确率> 80%-99%
    覆盖度>99%
    均一性< 1.6-10
  • 从sgRNA设计、文库构建到慢病毒包装的一站式服务
    从sgRNA设计、文库构建到慢病毒包装的一站式服务
服务详情
  • 服务项目
    服务详情
    周期
  • sgRNA设计
    针对目标基因群进行sgRNA序列设计(条数可选)
    1-2周
  • 芯片合成
    将所设计的所有sgRNA及阴性对照合成在一张芯片上
    3-4周
  • sgRNA文库构建
    将sgRNA构建到客户的目标载体上
    2-3周
  • 文库质粒大抽
    根据发货量进行转染级质粒抽提
    1周
  • 文库质检及NGS验证(可选)

    库容量大于100x

    文库正确率大于80%

    文库的均一性指标小于10

    2-3周
  • 病毒包装(可选)
    慢病毒包装，病毒滴度: 108TU/ml
    2-3周
  • 文库细胞pool构建

    抗性筛选测试

    慢病毒量及细胞数评估

    抗性筛选

    NGS检测

    4-5周
  • 高通量筛选
    正向筛选实验、反向筛选实验
    咨询
  • 药物抗性实验、报告基因检测
    咨询
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服务流程
CRISPR基因编辑筛选服务流程
 
案例分享查看详细

CRISPR sgRNA文库构建与筛选应用实例

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)

已知药物功能筛选其耐药靶点的方案：

1.明确该药物功能及其致死工作浓度。

2.构建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文库并侵染细胞，构建整合CRISPR-Cas9 gRNA的细胞混合克隆。

3.筛选：高浓度药物短期内持续作用细胞混合克隆，成活的细胞即为产生耐药性的细胞，其耐药性的产生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA导致的基因改变。

4.存活的细胞通过二代测序，比对得到gRNA 信息，从而推断出起作用的基因靶点。

常见问题
常见问题
基因编辑是对质粒还是基因组进行编辑？目前我们已经构建的成熟的编辑系统，涉及到的物种有哪些？按实验目的，可以分为哪几类？

    基因编辑是对基因组进行编辑。目前已经成熟的物种有大肠杆菌，酿酒酵母和毕赤酵母。

    按实验目的可分为：基因敲入、基因敲除、点突变。

CRISPR/Cas9和CRISPR/Cas12的优劣势是？

    简单来说，原核基因编辑相差不大，我们目前使用的是CRISPR/Cas9基因编辑。真核Cas12a更有优势。

    与Cas9相比：

    1 Cas12蛋白小，质粒或蛋白更容易进入细胞

    2 从经济方面来讲，Cas12a用crRNA进行编辑，crRNA约40-44nt，其合成的价格远低于sgRNA(约100nt)

    3 识别位点PAM序列不同。Cas12a核酸酶识别5’-TTTV，切割产生交错末端。Cas9切割产生平末端

基因编辑的方法分类是？

    1.同源重组

    2.核酸酶

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