CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于多种物种和领域的研究，显著提高了基因组编辑的效率。传统的sgRNA传递方法包括质粒转染和慢病毒感染，但存在基因插入和免疫反应的风险。目前，直接将Cas9和sgRNA形成的核糖核蛋白（RNP）转导到细胞中，具有更安全、更快速、脱靶效应更低、编辑效率更高的优势。这种方法正逐渐成为CRISPR/Cas9技术更有效的选择。
泓迅生物提供专业的合成技术，可为基因编辑研究人员提供两种策略的sgRNA合成服务：化学合成和体外转录。
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图1. Cas9-sgRNA复合物 |
图2. sgRNA的二级结构 |
泓迅生物CRISPR-Cas9 sgRNA设计中心针对小鼠的多个基因各设计8个sgRNA后进行体外sgRNA转录实验，实验周期短至2天，制备量达10-20μg，可以极快地满足相关细胞学实验的一般需求。
一步法合成gRNA DNA模板
1. 将gRNA DNA模板平连至pUC57载体测序，比对结果与设计序列一致。如图1所示。
图1.平连结果与设计序列比对图
2. 将通过体外转录得到的sgRNA在2%的琼脂糖中进行电泳，可以看到清晰条带。如图2所示。
图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图
3. 我们对其中一条sgRNA序列进行验证： 先将sgRNA逆转录获得cDNA，设计sgRNA扩增引物，经过PCR反应获得sgRNA的DNA序列；其次将DNA序列平连至pUC57载体进行测序，结果显示sgRNA序列正确。如图3所示。
图3. sgRNA序列验证琼脂糖凝胶电泳图
注：Lane1是sgRNA 逆转录cDNA；Lane2是经DNaseI处理的sgRNA；Lane3是体外转录的DNA模板
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