A：可以从以下几个方面进行尝试：

如果有稀有密码子，可以尝试重新进行密码子优化（即需要重新基因合成）

如果蛋白分子量过大或过小，可以尝试截短表达或融合大标签表达（即需要重新构质粒）。

如果是毒性蛋白，可以尝试pLysS菌株。

更换表达系统（即需要重新基因合成）。

A：可以从以下几个方面进行尝试：

a、优化宿主细胞（Origami B(DE3)，Rosetta gami(DE3)，Shuffle等）

b、与分子伴侣共表达，分子伴侣可以帮助蛋白形成正确的三维结构

C、融合促溶标签，(SUMO/GST/MBP/等)（这是我们最常用的促溶方法，促溶标签最常用sumo，而且原核系统免费提供酶切）

d、更换表达载体，pET系列载体表达量高，但包涵体概率也高，pCold低温表达载体理论上可提高蛋白可溶性

e、优化培养条件（温度、IPTG浓度、培养基成分）

f、分泌性表达，融合大肠杆菌分泌信号肽，将蛋白引导至周质空间（不建议，周质空间蛋白量少，浓度低）

A：重组蛋白是存在不表达的风险的，可能与蛋白自身性质有关，比如膜粘连蛋白、植物来源的蛋白，或者分子量过大或过小的蛋白、毒性蛋白等。

A：重组蛋白是存在不表达的风险的，可能与蛋白自身性质有关，比如膜粘连蛋白、植物来源的蛋白，或者分子量过大或过小的蛋白、毒性蛋白等。

A：可能是有的，理论上可能没有上清蛋白活性好。

A：优先亲和纯化，如果要求进行凝胶过滤层析，离子交换层析等，需要额外收费。

A：HIS/GST/MBP/Flag/Fc，其中Flag填料成本较高，需要额外收费。

A：原核系统可以使用pet-duet-1载体，分别在两个MSC区构建目的蛋白；

昆虫系统可以使用pFastBacDual载体，插入一条目的序列后，需反向互补后，再插入另一条序列。

哺乳系统可以构建两个质粒，一起转染，载体和细胞没有要求。

酵母系统可以构建两个质粒，pPIC9质粒先转化GS115菌株，检测蛋白若有表达， 将GS115制备成感受态再转入pPICZ质粒。

A：增加孵育时间：给予蛋白与填料足够的结合时间；增加填料体积：增加蛋白与填料之间碰撞几率，从而提高结合效率。

A：纯化过程中提高缓冲液盐离子浓度（<2M）助溶；添加DTT（<100mM）打开二硫键，防止蛋白形成聚体导致沉淀；添加甘油或蔗糖（5%-10%）等保护剂。

A：液体或者冻干发货。

A：sumo酶切、TEV酶切、3C酶切（优先SUMO酶切）。