A：重组蛋白是存在不表达的风险的，可能与蛋白自身性质有关，比如膜粘连蛋白、植物来源的蛋白，或者分子量过大或过小的蛋白、毒性蛋白等。

A：重组蛋白是存在不表达的风险的，可能与蛋白自身性质有关，比如膜粘连蛋白、植物来源的蛋白，或者分子量过大或过小的蛋白、毒性蛋白等。

A：可能是有的，理论上可能没有上清蛋白活性好。

A：优先亲和纯化，如果要求进行凝胶过滤层析，离子交换层析等，需要额外收费。

A：HIS/GST/MBP/Flag/Fc，其中Flag填料成本较高，需要额外收费。

A：原核系统可以使用pet-duet-1载体，分别在两个MSC区构建目的蛋白；

昆虫系统可以使用pFastBacDual载体，插入一条目的序列后，需反向互补后，再插入另一条序列。

哺乳系统可以构建两个质粒，一起转染，载体和细胞没有要求。

酵母系统可以构建两个质粒，pPIC9质粒先转化GS115菌株，检测蛋白若有表达， 将GS115制备成感受态再转入pPICZ质粒。

A：增加孵育时间：给予蛋白与填料足够的结合时间；增加填料体积：增加蛋白与填料之间碰撞几率，从而提高结合效率。

A：纯化过程中提高缓冲液盐离子浓度（<2M）助溶；添加DTT（<100mM）打开二硫键，防止蛋白形成聚体导致沉淀；添加甘油或蔗糖（5%-10%）等保护剂。

A：液体或者冻干发货。

A：sumo酶切、TEV酶切、3C酶切（优先SUMO酶切）。

A：可以从以下几个方面进行尝试：

更换不同的信号肽进行尝试；

在目的序列N端添加大标签，如MBP/Fc等，MBP在真核系统中可能不挂柱，还需要融合其他标签用于纯化，Fc标签可以用于纯化。