宿主细胞的选择取决于病毒载体的类型和目标应用，常用的宿主细胞包括HEK293T、HeLa、COS-7等，这些细胞系易于培养且适合病毒的复制和包装。

病毒颗粒通常在-80℃以下储存，并在运输过程中使用干冰或冰袋保持低温，以保持病毒的活性和稳定性。

基因编辑是对基因组进行编辑。目前已经成熟的物种有大肠杆菌，酿酒酵母和毕赤酵母。

按实验目的可分为：基因敲入、基因敲除、点突变。

简单来说，原核基因编辑相差不大，我们目前使用的是CRISPR/Cas9基因编辑。真核Cas12a更有优势。

与Cas9相比：

1 Cas12蛋白小，质粒或蛋白更容易进入细胞

2 从经济方面来讲，Cas12a用crRNA进行编辑，crRNA约40-44nt，其合成的价格远低于sgRNA(约100nt)

3 识别位点PAM序列不同。Cas12a核酸酶识别5’-TTTV，切割产生交错末端。Cas9切割产生平末端

1.同源重组

2.核酸酶

重组胶原蛋白是利用基因工程技术，通过特定的表达系统（如大肠杆菌、酵母、昆虫杆状病毒表达载体系统等）在体外生产出来的胶原蛋白。它与人体自然产生的胶原蛋白具有相同的氨基酸序列，因此具有很高的生物相容性和功能性。

1. 哺乳动物细胞

2. 酵母

3. 大肠杆菌

影响基因合成的因素主要包括：序列长度、DNA结构（重复序列、GC含量等因素）和宿主细胞稳定性等因素来决定。

每三个碱基表达一个氨基酸，移码现象是由于基因中增加或减少非三及三的倍数个碱基，会使得该位点后面的DNA序列产生移码现象，导致表达出来的蛋白非目的蛋白。

密码子偏好性是指不同的生物，对简并密码子使用频率不相同。

可能是由于引物设计不合理、模板质量不高或PCR程序设置错误等原因导致的。

穿梭载体含有两个或更多亲缘关系不同的复制子，这意味着它们能够在两种或多种不同的生物体中复制。例如，某些穿梭载体既能在原核生物（如大肠杆菌）中复制，又能在真核生物（如酵母或哺乳动物细胞）中复制。

穿梭载体通常含有选择性标记，如抗生素抗性基因等。这些标记基因使得研究人员能够方便地通过特定的筛选条件（如抗生素选择）来检测和筛选含有目的基因的克隆。

穿梭载体在导入目标生物体系时通常具有较高的效率。此外，穿梭载体在目标生物体系中的表达通常也相对稳定，这有助于减少实验结果的波动性和不确定性。