序列准确性:
反义寡核苷酸的序列必须与目标mRNA或DNA序列完全匹配或具有特定的互补性。任何序列错误都可能导致其失去与靶标结合的能力或产生非特异性结合。
在合成前,应仔细检查和验证寡核苷酸的序列,确保与预期的靶标序列一致。
纯度:
反义寡核苷酸的纯度对其功能至关重要。合成过程中可能产生的杂质,如缺失、插入、错配或未完全去除的副产物,都可能影响其稳定性和特异性。
应使用高效的纯化方法,如高效液相色谱(HPLC)或凝胶电泳,来去除这些杂质。
修饰:
反义寡核苷酸可能需要进行化学修饰以提高其稳定性、亲和力或降低其免疫原性。
在合成过程中,应确保修饰步骤的正确性和效率,以及修饰后寡核苷酸的纯度和稳定性。
硫代修饰:
硫代修饰(Phosphorothioate modifications)常用于提高反义寡核苷酸的稳定性和抗核酸酶降解能力。
在进行硫代修饰时,应确保修饰的均匀性和一致性,以避免对寡核苷酸的结合能力产生负面影响。
质量控制:
在合成过程中,应进行严格的质量控制,包括序列验证、纯度分析、修饰效率检测等。
还应确保合成批次之间的一致性,以及不同批次之间的可比较性。