原核蛋白表达系统（如大肠杆菌）具有快速、高产量、经济实惠等优势，适用于大规模蛋白生产。

可以采用密码子优化、改变表达宿主菌株、调整表达条件（如温度、培养基组分等）等方法来提高可溶性蛋白的表达水平。

在大肠杆菌表达系统中，部分外源蛋白可能会由于错误折叠而形成包涵体，主要原因包括外源蛋白的复杂结构或毒性。

1. 提高蛋白表达量：密码子优化可以显著提高外源基因在宿主细胞中的表达量，为后续的分离纯化等步骤提供便利。

2. 提高翻译效率：通过减少稀有密码子的使用，可以避免翻译过程中的瓶颈，提高整体的翻译效率。

3. 改善mRNA稳定性：优化后的mRNA二级结构更加稳定，有利于核糖体的结合和翻译过程的顺利进行。

为避免脱靶效应，可以通过以下几种方法：

   - 使用高特异性的Cas9变体。

   - 精确设计引导序列以尽量减少与非目标序列的相似性。

   - 在设计sgRNA时使用生物信息学工具预测潜在的脱靶位点并进行优化。

通过对sgRNA进行化学修饰（如在2'-OH位点进行修饰）可以提高其稳定性和活性。此外，优化sgRNA的设计以减少脱靶效应也有助于提高其效率。

特异性：确保siRNA序列特异性靶向目标基因，避免脱靶效应。

有效性：筛选具有高沉默效率的siRNA序列。

稳定性：优化siRNA序列以提高其在细胞内的稳定性和有效性。

qPCR：定量检测目标基因mRNA水平的变化。

Western Blot：检测目标基因编码蛋白质的表达水平。

荧光显微镜：通过荧光标记观察siRNA或shRNA在细胞中的分布和表达。

选择RNA聚合酶时，根据DNA模板上的启动子序列选择相应的酶，如T7 RNA聚合酶适用于T7启动子，T3 RNA聚合酶适用于T3启动子，SP6 RNA聚合酶适用于SP6启动子。

寡核苷酸应保存在-20℃下，此条件下可稳定保存一年以上。推荐以干燥形式存储，因为这样可以减少核酸酶导致的降解风险。

核苷修饰可以增加RNA的稳定性、翻译效率，并减少其在体内引起的免疫反应。

NGCodon^TM密码子优化技术是泓迅生物自主研发的技术，通过优化RNA的密码子使用，提高表达效率和稳定性。