可以用NNk的一个混合物，也可以用Trimer引物构建基因文库。

他设计是针对不同区域进行的一个设计，但是设计的条数是一样的。SgRNA序列是不一样的。抑制文库是单质粒系统，激活文库大部分都是双质粒系统。

要先确定客户是多基因还是单基因，还要确定设计几条。如果说按照芯片设计价格是3000，也可以按照条数收费

Trimer引物合成的一个优势，，可以根据客户的物种进行一个设计。合成的方式效果也好，偏差更低。

一代测序，转到细菌上进行一个扩大，挑选单克隆去看测序的结果是否是在我们设计的序列之内。

至少是200-300条，客户全基因组范围比较大的话会设计更多。

三保一套餐是我们为确保基因敲除成功而提供的一种服务。我们承诺，通过提供三条sgRNA选择，确保至少有一条sgRNA能够成功敲除目标基因，从而为客户提供更大的成功率和保障。

我们采用的目的细胞是HepG2、Hela、293T细胞，如果有其他细胞要求，可以选择定制化服务。

1. GC含量须在40%到80%之间，以确保sgRNA与目标DNA之间的稳定结合。

2. 确保sgRNA设计中的二级结构较少，如发夹结构和聚合酶终止序列。这些结构会影响克隆效率和向导的转录。

3. 去除polyA位点，如果以病毒作为递送工具，这些位点会破坏病毒包装。

4. 尽量减少错配，特别是PAM上游的前10个碱基。间隔区序列的后半部分可容忍错配，但靠近PAM位点的错配会破坏结合和随后的编辑。

5. sgRNA中的间隔区序列长度须与正在使用的Cas蛋白相匹配。两者之间的不一致会严重减低编辑效率。

6. 研究并选择最适合你需求的Cas蛋白。Cas蛋白在识别的PAM序列、切割类型及其他多个因素上存在差异，可能影响编辑性能。

7. 确保sgRNA启动子的位置不与其他启动子重叠，比如经常用于抗性基因转录的EF-1a启动子。与该启动子重叠会导致sgRNA的转录效率降低。

目前，市面上大多使用的是人基因组sgRNA文库，利用基因组sgRNA文库的筛选所得结果更为广谱但实验工程量大。而Syno^®人源通路文库具有以下特点：

1、基因总数少，sgRNA文库库容小，减少实验工程量及周期

2、Syno^®人源通路 sgRNA文库使用目的性强，一般是在已知基因范围内进行靶标筛选

3、可以选择多个pathway同时进行研究

因此，使用Syno^®人源通路 sgRNA文库前要清楚自己研究目的及通路基因，根据需求进行选择单条通路或多条通路sgRNA文库组合。

混合池是所有sgRNA质粒混合在一起，是默认的发货形式，客户可以直接用来转染细胞或进行慢病毒包装；阵列板式属于特色定制化服务，根据客户需求将每种sgRNA质粒置于单孔中，呈现阵列式分布以实现客户对文库的灵活运用。

以下是一些常用的在线设计sgRNA的网站以及它们的特点：

1.CRISPR Design Tools（https://www.benchling.com/crispr/）：Benchling是基于目标序列的算法来设计sgRNA，考虑了靶向性、特异性和副作用等因素。

2.CRISPOR（http://crispor.tefor.net/）：CRISPO使用最为广泛，是基于基因组的算法来设计sgRNA，考虑了靶向性、特异性和副作用等因素，并提供了对设计结果的详细分析。

3.CHOPCHOP（https://chopchop.rc.fas.harvard.edu/）：CHOPCHOP提供了一个用户友好的界面，使用了基于基因组的算法来设计sgRNA，也会考虑靶向性、特异性和效率等因素。

4.CRISPRscan（https://www.crisprscan.org/）：使用了基于机器学习的算法来预测sgRNA的效率，并提供了对设计结果的可视化分析。