特异性：确保siRNA序列特异性靶向目标基因，避免脱靶效应。

有效性：筛选具有高沉默效率的siRNA序列。

稳定性：优化siRNA序列以提高其在细胞内的稳定性和有效性。

1. 生物学实验：如基因敲除、基因沉默等。

2. 药物研发：用于开发新的药物候选物，或优化现有药物的药效和安全性。

3. 基因编辑：如CRISPR-Cas9基因编辑系统，需要特定的ASOs作为引导序列。

4. 临床诊断：用于诊断疾病的生物标志物检测等。

病毒载体的滴度测定通常采用qPCR、ddPCR、ELISA、TEM或基于细胞的感染实验等方法，以确定病毒颗粒的数量或感染单位。

宿主细胞的选择取决于病毒载体的类型和目标应用，常用的宿主细胞包括HEK293T、HeLa、COS-7等，这些细胞系易于培养且适合病毒的复制和包装。

病毒颗粒通常在-80℃以下储存，并在运输过程中使用干冰或冰袋保持低温，以保持病毒的活性和稳定性。

基因编辑是对基因组进行编辑。目前已经成熟的物种有大肠杆菌，酿酒酵母和毕赤酵母。

按实验目的可分为：基因敲入、基因敲除、点突变。

简单来说，原核基因编辑相差不大，我们目前使用的是CRISPR/Cas9基因编辑。真核Cas12a更有优势。

与Cas9相比：

1 Cas12蛋白小，质粒或蛋白更容易进入细胞

2 从经济方面来讲，Cas12a用crRNA进行编辑，crRNA约40-44nt，其合成的价格远低于sgRNA(约100nt)

3 识别位点PAM序列不同。Cas12a核酸酶识别5’-TTTV，切割产生交错末端。Cas9切割产生平末端

1.同源重组

2.核酸酶

重组胶原蛋白是利用基因工程技术，通过特定的表达系统（如大肠杆菌、酵母、昆虫杆状病毒表达载体系统等）在体外生产出来的胶原蛋白。它与人体自然产生的胶原蛋白具有相同的氨基酸序列，因此具有很高的生物相容性和功能性。

1. 哺乳动物细胞

2. 酵母

3. 大肠杆菌

影响基因合成的因素主要包括：序列长度、DNA结构（重复序列、GC含量等因素）和宿主细胞稳定性等因素来决定。

每三个碱基表达一个氨基酸，移码现象是由于基因中增加或减少非三及三的倍数个碱基，会使得该位点后面的DNA序列产生移码现象，导致表达出来的蛋白非目的蛋白。