在生物制药研发过程中，稳转细胞株被称为“药物研发的基石”，尤其对单克隆抗体、双特异性抗体、抗体偶联药物（ADC）以及重组蛋白疫苗的开发具有核心支撑作用。一株高效且稳定的细胞株，不仅直接影响目标蛋白的产量、产品质量与生产成本，还能够显著加快药物上市进程，甚至将开发周期缩短数年，因而成为企业提升竞争力的战略性资源。凭借其高度稳定的遗传特性和一致的蛋白表达能力，该类细胞株已被广泛应用于重组蛋白的大规模生产、抗体药物的工业化制备、结构解析研究以及药物筛选与功能评价等多个关键领域。

01. 稳转细胞系的应用场景

• 抗体药物生产：为临床前和临床阶段提供稳定、高表达的细胞株；
• 功能研究与筛选：用于抗体活性、亲和力、特异性等体外评价；
• 一致性保证：稳转株提供批次间一致性，符合GMP生产要求；
• 基因功能研究：也可用于其他重组蛋白的稳定表达研究。

单克隆抗体（mAb）是目前生物药市场中占比最大的类别，广泛应用于肿瘤、自身免疫病、感染性疾病等领域。稳转细胞株作为mAb生产的起点，其质量直接影响到后续工艺开发、规模化转移和最终药品的质量属性。近年来，随着基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）和启动子/载体系统的优化，稳转株构建效率显著提升。

02. 技术流程与挑战

稳转细胞株筛选流程

质粒线性化与回收

使用限制性内切酶（如PvuI）对表达质粒进行线性化，并通过磁珠纯化回收线性片段，确保后续整合效率。

细胞准备与电转

常用宿主细胞CHO-K1，经Optimem I洗涤后，与线性化质粒混合，通过电转仪（如Bio-Rad Gene Pulser Xcell）进行电转，参数需优化。

阳性筛选与扩增

使用含有筛选标记（如L-MSX）的培养基对转染后的细胞进行压力筛选，获得阳性细胞池（cell pool）。

ELISA鉴定表达量

通过抗原包被、一抗/二抗孵育和TMB显色，检测细胞上清中抗体表达量，筛选高表达池。

单克隆筛选与扩增

采用有限稀释法（limiting dilution）获得单克隆，进一步扩大培养至摇瓶规模，进行Fed-batch培养验证表达稳定性。

表达量与活性验证

通过SDS-PAGE、ELISA等方法验证抗体表达量、完整性和生物活性。

》技术难点

高产稳转株的构建不仅要求高表达量，还需保证抗体分子的正确折叠、糖基化修饰和稳定性。CHO-K1细胞是一个源自中国仓鼠卵巢的细胞系亚克隆，它因其卓越的重组蛋白生产能力、准确的人类-like翻译后修饰能力和良好的安全性，成为了生产治疗性蛋白（尤其是单克隆抗体）的首选平台。具有以下优势：

• 卓越的生产能力：

经过多年的工程化改造和筛选，CHO-K1细胞能够实现极高水平的重组蛋白表达。

• 准确的翻译后修饰：

这是其最核心的优势。作为哺乳动物细胞，CHO-K1能够完成复杂且与人类高度相似的翻译后修饰，特别是糖基化(Glycosylation)。产生的蛋白质（如抗体）具有正确的折叠结构、功能和药代动力学特性，保证了药物的安全性和有效性。

• 良好的安全性：

CHO-K1细胞对人类病毒的易感性较低，且自身不产生已知的人类致病病毒，极大地降低了生物制药产品中的病毒污染风险。

• 成熟的工艺平台：

数十年的研究使得CHO-K1细胞的培养、转染、筛选和放大工艺非常成熟。

03. 案例分享：抗体稳转株筛选实战

在本案例中，我们通过PvuI线性化质粒、电转CHO细胞、L-MSX筛选和高通量ELISA鉴定，成功获得一株表达量达0.8 g/L、活性优良（EC50=0.004）的稳转克隆2B1。该细胞株经Fed-batch培养验证，表现出良好的生长稳定性和表达一致性。

质粒线性化：使用PvuI酶切，经磁珠纯化后获得高纯度线性化片段；

电转与筛选：电转后使用含L-MSX的CD CHO培养基筛选阳性池；

ELISA阳性克隆筛选：鉴定出80%以上为阳性克隆，其中2B1克隆表达量最高；

ELISA 检测稳转株抗体活性图

Fed-batch培养：通过优化补料策略，最终表达量达到0.8 g/L；

2B1 补料后表达不同天数的 SDS-PAGE 电泳图

活性验证：稳转株抗体活性（EC50=0.004）与瞬转株（EC50=0.003）相当，表明稳转株具有良好的功能活性。

ELISA 检测稳转和瞬转表达 Flag 抗体的活性

结果表明，该稳转株不仅表达量高，且抗体结构完整、活性良好，适用于后续放大生产。

泓迅生物稳转细胞株筛选服务

泓迅生物提供一系列细胞稳转株的构建和筛选服务，用于全长抗体及抗体片段、Fc融合蛋白、多种细胞表面受体、胞质和分泌蛋白等重组蛋白/抗体的稳定及规模化生产。

• CHO1.0稳转载体，配合嘌呤霉素+MTX筛选系统。
• 从基因合成到筛选，提供全流程服务。
• 高效稳定转染及Pool筛选。
• 可对重组蛋白/抗体全长或片段进行个性化表达。

为什么选择泓迅

泓迅科技作为合成生物学赋能技术的领导者之一,建立了全面的抗体工程一站式服务平台,提供基于抗体“读”(测序&设计)-“写”(合成&表达)一“编”(亲和力成熟&人源化&耦连)的全方位技术服务,为科研院所和生物制药公司提供高效、高品质、高性价比的工程抗体及技术支持。

领先的技术优势—AI密码子优化分析（专利技术）